1 细胞培养技术

细胞培养技术是一种体外增殖细胞的常规实验技术，目前被广泛用于教学、科研和临床实验。细胞培养过程中最大的威胁就是细胞污染，凡是混入细胞培养环境中，细胞生存有害的成分和造成细胞不纯的异物都应视为污染。污染控制是细胞培养能否成功的关键所在。引起培养细胞污染的微生物有细菌、真菌、黑胶虫、支原体等，及时检测并鉴定出所培养的细胞是否被污染至关重要。

2 细菌真菌污染及检测方法

菌和真菌污染是最常见的两类细胞污染类型。其中，常见的细菌污染有枯草杆菌，大肠杆菌，假单胞菌，白色葡萄球菌等，常见的真菌污染有烟曲霉，黑曲霉，毛霉菌，白色念珠菌和酵母菌等。检测方法：通过观察培养基的颜色、漂浮物、p H值或在显微镜下观察细胞及其生长状态，从而能初步判断该细胞是否受细菌、真菌污染。细菌污染会导致培养基出现浑浊、颜色改变以及p H值急剧变化, 受污染的贴壁细胞在几天内会逐渐脱壁死亡。真菌污染后的细胞生长速度变慢, 培养基中会漂浮白色、浅黄色或黑色的小点。

3 支原体污染

许多调查及研究显示，世界范围内正在使用的细胞体系中支原体污染发生率达30% ～60%，污染细胞的支原体主要有人源、猪源和牛源三类。支原体污染会影响细胞的形态、功能、代谢、细胞膜、生长速率、诱导染色体畸变、细胞内信号传导等各种细胞特性。受支原体污染的细胞在培养时培养基的p H值不会发生改变, 也不会浑浊, 因此, 很难直接观察出细胞是否受到污染。

4 常用的支原体检测方法

有培养法、DNA荧光染色法、酶联免疫吸附法和PCR法，荧光定量PCR法，恒温荧光等。DNA荧光染色法是用Hoechst33342对细胞进行染色，荧光染色法检测支原体污染，就是利用 Hoechst 33342 可与双链 DNA 结合，在紫外光的激发下，释放强烈的蓝色荧光这一特点对细胞加以染色。经过染色，在荧光显微镜下，可见细胞周围或细胞膜上有大小不等、不规则荧光着色颗粒，为支原体污染细胞，此种方法容易出现假阳性，需要用PCR法进一步检测。通过支原体通用引物对细胞进行PCR扩增，利用琼脂糖凝胶电泳进行检测, 通过比对分析扩增产物的大小, 可进行支原体感染的鉴定。苏州先达基因独家专利产品支原体检测试剂盒，利用恒温扩增荧光检测，提供了一种快速简单灵敏的细胞支原体检测方法，能检测的支原体种类超过130（亚）种。两步操作，20min出结果，支原体检测从未如此简单！

5细胞交叉污染

同一个细胞培养室培养不同种类的细胞，因贴错标签，取错细胞就有可能出现细胞间交叉污染。确保实验用的细胞是单一且正确的细胞很重要。常见的细胞鉴定法有同工酶图谱分析法、人类白细胞抗原分型法和短串联重复序列STR图谱分析法。

细胞培养过程中的上述污染源可能有环境、实验试剂耗材、空气等，在细胞培养的任何一个环节，都需要保持无菌操作意识，防止细胞污染。因此, 规范实验操作、避免连续使用抗生素、拒绝“免费”细胞、从规范的细胞库购买细胞等各种方法都有助于减少实验室中的细胞污染。