在培养细胞时，人们常常关注细菌和真菌的污染，认为它们是细胞培养的主要干扰因素。但其实，更严重的是支原体 的感染，它的发生率非常高，而且不易被发现。本文为您分析污染细胞的支原体从哪里来。

 不仅普通光镜下无法发现支原体，而且培养基也不容易变色。但支原体对细胞的各种干扰却是不容忽视的。它不仅导致细胞状态不佳，生长速度慢，而且会使细胞内DNA、RNA及蛋白表达发生改变，严重影响实验结果。因此，在预防和治疗支原体污染之前，有必要去了解细胞被支原体污染的可能途径。

  支原体可以通过顶部的细胞器特异性和宿主细胞结合。这些顶部的细胞器含有高浓度的粘附蛋白，可粘附到真核细胞并穿入到细胞内部。支原体缺乏细胞壁，它们的胞膜可和宿主的细胞膜融合并交换其胞膜和胞浆成分。

  

支原体污染的频率和污染来源

  细胞培养中有几种支原体污染与人、牛和猪有关。实验室的工作人员是口腔支原体、发酵支原体和人型支原体的主要来源。这三种支原体占细胞培养中支原体污染的一半以上，它们主要存在于人的口咽部。精氨酸支原体和无胆甾原体是另两类细胞培养中的支原体，它们来自胎牛血清和新生牛血清。胰酶如果是猪来源的，那么也可能存在猪鼻支原体。图1显示了支原体的常见宿主以及污染细胞的发生率。

图1：在细胞培养中出现的不同种类的支原体频率

  

支原体在实验室内的扩散来源

  McGarrity设计了一个模型，来发现支原体是如何在超净台里的细胞传代过程中发生传播的。他先故意用支原体感染细胞。在超净台中，用胰蛋白酶消化该污染的细胞后发现，活的支原体可从细胞培养瓶外的细胞计数板、移液器、废弃盘中被技术员分离出来。即使过了四至六天，活的支原体仍然可以存在于超净台表面，可被成功恢复。在超净台里，传代完被支原体污染的细胞后，再传代干净的不含支原体的细胞，结果仍然在6周后被检测出支原体阳性。这些结果表明，支原体的传播是多么的快速和容易！它也警告我们，要最大限度的避免支原体的污染，因为一瓶细胞发生污染，就会带来支原体传播的可能。

  

未真正消毒的耗材、培养基和溶液

  不恰当的消毒导致污染的另一个原因。高压锅或干热烤箱中堆积太多的物品造成加热不均，使一小部分耗材未得到消毒。灭菌循环时间过短是另一个消毒上犯的错误，特别是对于超过500ml的液体，或者是包含固体成分的溶液，或胶体物质如琼脂、淀粉等。为了实现无菌，灭菌材料的尺寸、质量、性质和体积必须始终考虑。

  在无菌和无昆虫区域存放消毒好的物品，使防止再次污染的前提。良好的无菌操作也是至关重要的。

  

实验室人员

  在因人导致的细胞支原体污染中，口腔支原体发生率最高，它主要存在人的口咽部。发酵支原体和唾液支原体也在污染的细胞培养液中被检测出来，不过发生率更低。

  

被支原体污染的细胞

  实验室内细胞支原体的相互传染，有必要对于从外源获得的新的细胞系进行支原体检测。一瓶细胞中的单个支原体的存在足以威胁到其他培养的细胞。支原体的污染能通过细胞操作产生的气溶胶或液滴传播。所以，应一次只操作一种细胞，为每种细胞系配置单独的培养基和试剂，这能避免支原体的污染。

  细胞培养的正确操作和对新培养的细胞定期进行支原体检测，可以减少支原体污染的机会。现在市面上有很多支原体检测试剂盒，但是这些方法或是因为敏感性差容易出现假阴性结果，或是因为检测范围小不能检测到所有的支原体污染，或是因为试验周期长费时费力。。先达基因研发了一种恒温广谱支原体检测试剂盒，基于其实时荧光恒温核酸检测技术（ERA），可以在恒定的低温下（25-42）对痕量的支原体种内保守性DNA片段进行特异性的扩增，扩增反应可以在20min内完成，该试剂盒检测范围涵盖130种支原体

下一篇:《新型冠状病毒肺炎诊疗方案（试行第九版）》修订要点
上一篇:一种细胞污染支原体的快速检测方法