MiRNAs是转录后调节基因表达的小的非编码RNA。MiRNAs的异常表达与许多疾病有关。MiRNAs可以作为癌症和其他人类疾病的预后和诊断的潜在生物标记物。然而，miRNAs的短序列和高序列相似性阻碍了检测。

此次研究提出了一种整合polyA尾部和CRISPR/Cas12a的方法，研究团队使用先达基因商品化的RPA试剂盒(GenDx)进行miRNA cDNA的等温扩增，以高特异性和灵敏度扩增和检测所有miRNA。

PolyA拖尾能够有效扩增RNA，并为Cas12a引入通用PAM序列以解锁其PAM限制。CRISPR-Cas系统保证了对单个碱基错配的核酸序列的特异识别。检测限（LOD）低至50 fM。通过对多个癌细胞样本的miRNA分析，验证了基于polyA CRISPR/Cas12a的miRNA检测的实际应用能力。随着RNA样本稳定性的提高、成本的降低、特异性和敏感性的提高，该方法在扩大到miRNA相关疾病的平行诊断集方面显示出巨大的潜力。

原文：《PCDetection: PolyA-CRISPR/Cas12a-based miRNA detection without PAM restriction （IF:12.545）》

DOI ：10.1016/j.bios.2022.114497

链接：https://doi.org/10.1016/j.bios.2022.114497