导读

据共研研究院、禽报网数据整理，2021年我国商品鹅出栏量达6.61亿只，商品代鸭出栏量约为35.01亿羽。由鹅星状病毒(GAstV)引起的鹅致死性痛风，自2018年蔓延至今，该病毒既可以由种鹅垂直传播，也可以在雏鹅间水平传播，甚至在一些鸭体内也有发现。其20% ~ 50%不等的死亡率，给鹅、鸭殖业造成了严重的经济损失。为了实现对GAstV的简便、灵敏的检测，安徽农业大学动物科学技术学院安徽省动物食品质量与生物安全工程实验室、安徽农业大学兽医病理生物学与疾病控制安徽省重点实验室等的Kezong Qi团队等将先达基因RT-ERA超增技术和CRISPR-Cas12a技术相结合，建立了一种新的快速诊断检测。

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研究内容

为了实现对GAstV的简便、灵敏的检测，Kezong Qi团队等将RT-ERA超增技术和CRISPR-Cas12a技术相结合，设计了RT-ERA引物，20min内扩增出GAstV-ORF2基因的保守区域，再在反应体系中加入Cas12a/crRNA复合体，在37℃-42℃作用下30min即可检测到目的基因序列。实现了对GAstV的特异性检测，与非GAstV模板无交叉反应，最低检测灵敏度为8拷贝/管。可在1h内完成整个实验过程，包括RNA提取(15min)、RT-ERA反应(20min)、CRISPR-Cas12a/crRNA检测(5min)和结果读出(2min内)。RT-ERA和CRISPR-Cas12a的结合为偏远地区农场GAstV感染的控制和监测提供了一种便捷且特异性强的方法。

研究结论

Kezong Qi团队等建立了一种新的检测鹅星状病毒GAstV的方法。该方法将RT-ERA和Cas12a技术结合在一起，具有灵敏度高（最低检测灵敏度为8拷贝/管）、特异性强（对GAstV的特异性检测，与非GAstV模板无交叉反应）、实验时间短（1小时实现整体实验过程）、操作简单及所需设备少（简单加样，利用便携式加热器和紫外线灯即可完成检测）等显著优点，非常适合在偏远地区等养殖场现场，由经过简单培训的养殖场的工作人员直接对鹅星状病毒的感染进行日常监测。

相关产品

本次研究中采用了先达基因的RT-基础型核酸扩增试剂（ERA法)【货号KS102】，为现场检测节约了时间。

RT-基础型核酸扩增试剂（ERA法) 应用于核酸RNA的快速扩增，检测的灵敏度高，能够将痕量的核酸模板扩增到可以检出的水平。在恒定温度（37℃-42℃）下可对特异基因进行扩增及定性检测，可用琼脂糖凝胶电泳等终点法进行结果检测，也可以在5-10分钟的短暂扩增后，结合CRISPR/Cas检测系统进行进一步的检测。

原文：《Facile, ultrasensitive, and highly specific diagnosis of goose astrovirus via reverse transcription-enzymatic recombinase amplification coupled with a CRISPR-Cas12a system detection（IF: 4.014）》

作者：Kankan Yang, Wuyin Zhang, Liang Xu, Qi Liu, Xiangjun Song, Ying Shao, Jian Tu, and Kezong Qi

期刊：Poultry science