T7耐热RNA聚合酶2.0
（产品货号：EM118）

描述：T7耐热RNA聚合酶2.0是一种经基因工程改造的DNA依赖性RNA聚合酶，对T7噬菌体启动子（TAATACGACT CACTATAG）具有高度特异性，跟野生型噬菌体 T7 RNA 聚合酶相比，它可在更高的温度下进行体外转录。T7耐热RNA聚合酶2.0可在37-52℃条件下进行高效的体外转录，最佳温度为37℃，50℃反应条件下，仍然保留50%以上的活性（野生型在此温度下无活性）。

这种高温的反应特性有益于以下几个方面的实验：

（1）提升了GC含量较高RNA的转录效率；

（2）提升了长片段RNA的合成能力；

（3）在使用帽类似物时，提高了共转录的加帽效率；

（4）减少了dsRNA副产物的形成，降低了合成RNA的免疫原性。

产品组分与规格

货号	组 分	浓度	5,000U	25,000U
EM118	T7 RNA Polymerase 2.0 (50 U/μl)	8 U/μl	1管×100μl	1管×500μl
	5×T7 Transcription Buffer	--	1管×1 ml	5管×1 ml

活性定义

在标准反应体系下，50℃ 1 小时内将 1 nmol 的 ATP 掺入酸不溶物所需要的酶量定义为一个活性单位。

储存

置于-20°C 可保存 2 年，避免反复冻融。

使用方法

1. 按以下组分配制反应体系：

组分	每管加样量
5×T7 Transcription buffer	4μl
rNTP Mixture（25 mM each）	3.2μl
Linearized template DNA	0.2~1 μg
RNase Inhibitor（40U/μl）	0.5μl
T7 RNA Polymerase 2.0 (50 U/μl)	1~2μl
Rnase Free H2O	up to 20 μl

2. 按以下条件在仪器上进行反应条件设置

温度	时间
50℃	1-3h

3. 使用 RNaseFree DnaseI 去除DNA 模板（可选） 在体外转录反应结束后，向上述 20μl 反应液中加入5μl的10×RD Buffer和2μl RNaseFree DnaseI(10U/μl)，并加入23μl的Rnase Free H₂O 至50μl，37℃孵育15min。

4. 转录产物的纯化：体外转录产物可选用RNA纯化试剂盒进行柱式纯化，以去除多余的盐、蛋白等杂质。

5. 热失活

温度	时间
75℃	10min

使用注意事项

1.转录DNA模板的种类：推荐使用含T7启动子的线性化质粒和PCR产物作为模板。

2.转录模板的纯度会显著影响体外转录反应。在质粒DNA抽提过程中残留的RnaseA会显著影响转录RNA的质量。通过酚-氯仿抽提的质粒DNA为最佳模板。

3.该酶对高浓度NaCl 或KCl 不耐受，当其浓度高于150mM 时，其活性受到显著抑制（~50%）。

4.在20μl 反应体系中加入 0.02U 热稳定无机焦磷酸酶可显著提高转录产量（提高 25~50%）。

本类产品为八联管式检测试剂盒包装形式。
[检验方法]	恒温荧光法