耐热逆转录酶使用说明书
（产品货号：EM117）

描述：该酶是在鼠源病毒反转录酶基础上进行定点突变改良而得。该酶去除了 RNase H活性中，从而避免反转录过程中 降解RNA。同时经过突变文库筛选，使得其热稳定性更强，可耐受65°C高温反应。相比于低温条件下反转录反应，釆用高温反转录可显著打开RNA二级结构，从而提高复杂RNA 模板的扩增性能、提高反转录cDNA的长度和产量，从而提高后续检测的灵敏度。

货号	组 分	浓度	10,000 U	50,000 U
EM117	逆转录酶	200U/µl	1管×50μl	1管×250μl
	10×RT Buffer	--	1管×500μl	5管×1ml

以poly(rA)为模板、oligo(dT)为引物，在37°C 条件下，10分钟内催化1 nmol的dTTP掺入形成酸不溶性沉淀物所需要的酶量，定义为一个活性单位。

-20℃，可保存3年。

1. 按以下组分配制反应体系：

ThermoStable V RTase	0.25-1 ul
10×RT Buffer	2 ul
dNTP Mixture (10 mM each)	1 ul
Total RNA or Poly(A) RNA	0.1-2 ug
20×Oliqo dT(25)&Random Primer *	1 ul
RNase Inhibitor (40 U/ul)	0.5 ul
RNase Free H2O	Ud to 20 ul
*注：Oligo dT(25)使用浓度为 20~50 pM,如使用 Random9 随机引物可使用125µM，基因特异性引物可使用5µM。

2. 在PCR仪上按下列条件进行逆转录反应

温度	时间
30℃	5min
*37-65℃	15-60min
85℃	10min
4℃

3. 使用注意事项：

1.通常反转录温度设置为50°C，无论是高GC或长片段模板， 均可获得综合性的cDNA产量。在釆用65°C反应条件时可显著提高＞75%GC含量的cDNA产物。

2.反转录所得的cDNA可直接用于PCR反应或储存于 -20°C。

详见说明书：耐热逆转录酶使用说明书